CD-антигены лейкоцитов — дифференцировочные кластеры — CD

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Описание

Иммуногистохимическое исследование хронического эндометрита с типированием плазматических клеток (CD-138) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для проведения дифференциальной диагностики хронического эндометрита. ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования. Иммуногистохимическое исследование Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов. Хронический эндометрит Хронический эндометрит — это клинико-морфологический синдром, при котором возникают функциональные и структурные изменения слизистой полости матки вследствие повреждения клеток эндометрия инфекционным агентом. Хронический эндометрит может протекать без отсутствия клинических признаков. Он часто является причиной нарушения репродуктивной функции, вплоть до бесплодия. По этиологическому фактору хронический эндометрит бывает специфическим (с выявлением инфекции) или неспецифическим (полимикробной ассоциации). Факторы риска развития хронического эндометрита:

  • Инфекционно-воспалительный процесс в малом тазу.
  • Наличие внутриматочной спирали.
  • Инфекции влагалища и шейки матки.
  • Бактериальный вагиноз.
  • Деформации полости матки с нарушением циклического отторжения эндометрия.
  • Инвазивные вмешательства в полость матки.
  • Лучевая терапия в области органов малого таза.
  • Раннее начало половой жизни.
  • Курение.
  • Употребление алкоголя.

В результате воздействия патологического фактора развивается воспалительная реакция, которая является универсальным способом защиты в организм. Про хроническом эндометрите возникает воспаление в интерстициальной ткани. Оно проявляется инфильтраций макрофагами, лимфоцитами, плазматическими клетками и фиброзом ткани. На местном уровне наблюдается активация цитокинов-медиаторов воспаления. Цитокины способствуют дополнительному привлечению в зону воспаления лимфоцитов, активации нейтрофилов и макрофагов. В результате воспаления наблюдается повреждение эпителия, нарушение его пролиферации и нормальной циклической трансформации. «Золотой стандарт» в диагностике хронического эндометрита это гистологическое исследование. Диагноз выставляется врачом-патоморфологом на основании изучения биоптатов эндометрия. Морфологически заболевание проявляется инфильтрацией стромы эндометрия плазматическими клетками. В настоящее время воспалительные заболевания органов малого таза относят к аутоиммунному процессу, который протекает как самоподдерживающаяся патологическая реакция. Иммуногистохимическое исследование определяет характер иммунологических нарушений. Анализ выявляет пациенток с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения. CD-138 Это маркёр плазматических клеток. Его определение показано при неполной морфологической картине хронического эндометрита. Показания к проведению ИГХ-исследования:

  • бесплодие;
  • хронический эндометрит;
  • воспалительные процессы слизистой полости матки.

Подготовка Подготовка определяется лечащим врачом. Диагностическое выскабливание слизистой оболочки матки рекомендовано проводить в среднюю и позднюю фазу пролиферации — на 7–10-й день менструального цикла. Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стёкла. В случае если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол. При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо предоставить протокол гистологического исследования. Интерпретация результатов Ответ выдаётся в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.

Номенклатура

Номенклатура была предложена на 1-й Международной конференции по антигенам дифференцировки лейкоцитов человека (Париж , ). Система создана для упорядочивания большого количества моноклональных антител к эпитопам на поверхности лейкоцитов, полученных в лабораториях во всём мире. Таким образом, определённый CD-антиген приписывается к группе моноклональных антител (необходимо наличие, по крайней мере, двух различных клонов), которые распознают один и тот же эпитоп на поверхности клетки. CD-антигеном также называют и непосредственно сам белок -маркер, с которым реагируют данные антитела. Следует отметить, что данная номенклатура классифицирует кластеры безотносительно клеточной функции белка. Нумерация идёт в хронологическом порядке от ранее описанных антигенов к более поздним.

В настоящее время данная классификация значительно расширена и включает не только лейкоциты , но и другие типы клеток . Более того, многие CD-антигены являются не поверхностными, а внутриклеточными белками-маркерами. Некоторые из них являются не белками, а поверхностными углеводами (например, CD15). Насчитывается более 320 антигенов и их подтипов.

Номенклатура

Номенклатура была предложена на 1-й Международной конференции по антигенам дифференцировки лейкоцитов человека (Париж , ). Система создана для упорядочивания большого количества моноклональных антител к эпитопам на поверхности лейкоцитов, полученных в лабораториях во всём мире. Таким образом, определённый CD-антиген приписывается к группе моноклональных антител (необходимо наличие, по крайней мере, двух различных клонов), которые распознают один и тот же эпитоп на поверхности клетки. CD-антигеном также называют и непосредственно сам белок -маркер, с которым реагируют данные антитела. Следует отметить, что данная номенклатура классифицирует кластеры безотносительно клеточной функции белка. Нумерация идёт в хронологическом порядке от ранее описанных антигенов к более поздним.

В настоящее время данная классификация значительно расширена и включает не только лейкоциты , но и другие типы клеток . Более того, многие CD-антигены являются не поверхностными, а внутриклеточными белками-маркерами. Некоторые из них являются не белками, а поверхностными углеводами (например, CD15). Насчитывается более 320 антигенов и их подтипов.

КЛАССИФИКАЦИИ АНТИГЕНОВ ЛЕЙКОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА: КРАТКАЯ ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКА

Разработка лауреатами Нобелевской премии G. Kohler и C. Milstein (1975) способа получения моноклональных антител (МкАт) привела к настоящей революции в иммунологии и многих областях биологии и медицины. Развитие гибридомной технологии способствовало получению в широких масш­табах высокочувствительных реагентов, взаимодействующих с высокой специфичностью с антигенами поверхностных мембран лейкоцитов и клеток других тканей и органов. Одновременно возникла проблема, обусловленная тем, что многие МкАт, полученные в разных лабораториях и распознающие одни и те же молекулы, стали получать различные наименования.

Читайте также:  Введение, Гипертоническая болезнь, Этиология и патогенез ГБ.

Первая попытка разработать принципы классификации антигенов лейкоцитов человека, выявляемых МкАт со сходной специфичностью, была предпринята на I Международном рабочем совещании по дифференцировочным антигенам лейкоцитов человека (human leucocyte differentiation antigens — HLDA) в Париже в 1982 г. [1]. Исследования, выполненные 55 коллективами ученых из 14 стран по единому заранее разработанному протоколу, позволили объединить изученные к тому времени антигены с учетом их специфичности в 15 групп, или кластеров, обозначенных буквами CD (claster of differentiation). В последующие годы указанная номенклатура была принята научным сообществом, признана Международным союзом иммунологических обществ и одобрена Всемирной организацией здравоохранения.

В настоящее время рабочие совещания HLDA проводятся неправительственной организацией Human Cell Differentiation Molecules (HCDM) со штаб-квартирой в Барселоне (Испания) под эгидой комитетов Международного союза иммунологических обществ и Всемирной организации здравоохранения по номенклатуре и стандартизации. Одной из ключевых миссий HCDM является проведение широкомасштабных оценок структуры, функции и распределения антигенов поверхностных мембран лейкоцитов человека и других молекул клеток иммунной системы [2]. Кроме того, по решению Совета HCDM был расширен круг исследований с возможностью анализа антигенов не только лейкоцитов, но и стромальных и иных клеток, имеющих отношение к иммунной системе. Предполагается также, помимо поверхностных антигенов, охарактеризовать и внутриклеточные молекулы, принимающие участие в передаче регуляторных сигналов.

На последующих международных рабочих совещаниях и конференциях, в которых принимали участие и украинские ученые, работали секции, посвященные исследованию гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и кроветворных клеток-предшественников, тромбоцитов, дендритных и эндотелиальных клеток с использованием МкАт, полученных в лабораториях разных стран. Для характеристики молекул CD, используемых в качестве маркеров при выделении и идентификации различных популяций и субпопуляций лейкоцитов в норме, при разных заболеваниях и особенно при иммунофенотипировании и диагностике различных форм опухолей кроветворной и лимфоидной ткани, широко применяются методы проточной цитометрии, иммуногистохимии, иммуноцитохимии и иммунобиохимии (иммунопреципитация, иммуноблоттинг). Для значительной части антигенов, вошедших в CD, методами генной инженерии были клонированы гены, получены трансфектанты. Поэтому в настоящее время наименования CD существуют в контексте согласованной номенклатуры названий генов.

На проведенных до настоящего времени 11 Международных рабочих совещаниях HLDA (табл. 1) были представлены более чем 400 молекул в составе 371 CD [3–16]. Краткое изложение данных, касающихся антигенов лейкоцитов и других клеток кроветворной и лимфоидной ткани, было приведено нами ранее [17, 18].

Нормальные значения Т-лимфоцитов в анализе крови

Нормальные показатели лимфоцитов различаются у разных возрастных групп. Связано с индивидуальными особенностями иммунной системы. Объем вилочковой железы, в которой находится основная часть агранулоцитов, в процессе старения уменьшается. До шестилетнего возраста в кровеносном русле преобладают лимфоциты, а с 6 лет – нейтрофилы.

Процентное соотношение количества Т-лимфоцитов в крови у разных возрастных групп:

Нормальные значения Т-лимфоцитов в анализе крови
  • У новорожденных показатель составляет 14-36% от общего числа лейкоцитов.
  • У грудных детей варьируется в пределах 41-78%.
  • У детей от 12 месяцев до 15 лет постепенно снижается до 23-50%.
  • У взрослых варьируется в диапазоне 18-36%.

Анализ количества Т-лимфоцитов является частным случаем общеклинического исследования крови. Данное исследование позволяет определить относительное и абсолютное содержание лимфоцитов в кровеносном русле. (иммунограмму) проводят для выявления концентрации лимфоцитов. Иммунограмма отображает показатели В и Т-клеток. Нормой Т-лимфоцитов принято считать 48-68%, а В-клеток – 4-18%. Соотношение Т-хелперов и Т-киллеров не должно в норме превышать 2.0.

Читайте также:  Диф диагностика апластической анемии и лейкоза

Иммунофенотипирование

Система кластеров дифференцировки применяется в иммунофенотипировании для отнесения клеток к тому или иному типу по представленным на клеточных мембранах молекулам-маркёрам. Наличие определённых молекул может быть ассоциировано с соответствующими иммунными функциями. Хотя наличие одного типа CD обычно не позволяет точно определить популяцию клетки (за исключением нескольких примеров), сочетания маркёров позволяют определить её достаточно чётко.

СD -молекулы, используемые для сортировки клеток в различных методах, таких как проточная цитометрия .

Тип (популяция) клеток CD-маркеры
Стволовые клетки CD34 +, CD31 —
Все лейкоциты CD45 +
Гранулоциты CD45+, CD15 +
Моноциты CD45+, CD14 +
T-лимфоциты CD45+, CD3 +
Т-хелперы CD45+, CD3+, CD4 +
Цитотоксические Т-лимфоциты CD45+, CD3+, CD8 +
B-лимфоциты CD45+, CD19 + или CD45+, CD20 +
Тромбоциты CD45+, CD61 +
Естественные киллеры CD16+, CD56 +, CD3-

Два наиболее широко используемых CD -маркера — CD4 и CD8 , которые соответственно являются характерными для T-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов . Эти молекулы определяются в сочетании с CD3+, так и с другими маркерами для других популяций клеток (некоторые макрофаги экспрессируют низкие уровни CD4;

Т-лимфоцит ы (Т-клетки ) выполняют различные функции, в связи с чем их подразделяют на субпопуляции. Т-клетки распознают Аг, в том числе переработанные Аг-представляющими клетками, обеспечивают реализацию клеточных иммунных реакций. Кроме того, Т-лимфоциты взаимодействуют с В-лимфоцитами в ходе выработки последними гуморальных иммунных реакций. Активация Т-клеток происходит под действием макрофагов.

Созревание Т-клеток

Предшественники Т-клеток (тимоциты) созревают в вилочковой железе. Их дифференцировку регулируют взаимодействия с эпителиальными и дендритными клетками стромы тимуса, а также гормоноподобные полипептидные факторы эпителиальных клеток тимуса (например, тимозины, тимопоэтины).

Таблица 10-7. Основные цитокины иммунного ответа

Маркёры Т-клеток

Т-клетки обладают маркёрами — специфическими поверхностными белковыми молекулами, присущими тем или иным субпопуляциям этих клеток.

CD-маркёры Т-лимфоцитов.

При дифференцировке Т-лимфоцитов на их плазмолемме появляются специфические Аг, выступающие в роли маркёров. Эти так называемые «кластеры дифференцировк и» — CD-маркёры [от англ. cluster of differentiation] — указывают на функциональные способности лимфоцитов и некоторых других клеток. CD-маркёры идентифицируют с помощью моноклональных AT. После выхода зрелых клеток из тимуса они экспрессируют CD4 или CD8, а также CD3. При некоторых иммунодефицитах обнаруживают нарушения нормального содержания клеток с тем или иным маркёром (например, СD4+-клеток при СПИДе). Т-клетки подразделяют на субпопуляции в соответствии с их функцией и профилем мембранных маркёров, в частности CD-Aг.